复合机制介导的α-常春藤皂苷肝肿瘤主动靶向给药系统研究

【摘要】本文以肝肿瘤细胞上的ASGPR和CD147分子为靶标，采用N-乳糖酰壳聚糖（GC）和CD147单抗分别实现受体介导与抗体介导，以α-常春藤皂苷为模型药物，将其制备成“受体+抗体”的双重复合机制介导的肝肿瘤主动靶向纳米给药系统。采用乳化溶剂扩散法制备了α-Hed-GC-NP，考察并优化了纳米粒的处方和制备工艺，确定影响纳米粒质量的关键要素为GC用量：50mg，磷脂用量：80mg，有机相体积：4mL。所制得的α-Hed-GC-NP外观圆整、分布均匀，平均粒径（88.70±1.22）nm，包封率（78.53±4.39）%，P.I.值0.105±0.011；药物在载体材料中分散均匀，释药行为具有一定的pH敏感性和缓释特性。建立了CD147单抗的含量和活性测定方法，采用偶联法、溶解法、注入法、吸附法及修饰法等5种方法制备了α-Hed-GC-CD147-NP，分别进行粒径测定、FT-IR表征和纳米粒中单抗结合活性测定。结果表明，CD147均被α-Hed-GC-NP有效包载，采用修饰法制备的α-Hed-GC-CD147-NP，平均粒径为（139.53±4.17）nm，CD147单抗的修饰量为1.25μg/mgNP，单抗的结合活性保留率为52.29%。对α-Hed-GC-CD147-NP的细胞毒作用、诱导细胞凋亡、细胞摄取率及摄取过程进行考察，并与其它3种纳米粒进行比较。结果表明，α-Hed及其含药纳米粒对SMMC-7721和HepG2两种细胞均有显著的抑制作用，α-Hed-GC-CD147-NP对两种细胞的IC50最低，分别为（23.51±1.22）、（23.30±0.22）μg/mL；纳米粒能诱导细胞凋亡，并呈现剂量依赖性，α-Hed-GC-CD147-NP低、中、高剂量（50、100、200μg/mL）诱导HepG2细胞的凋亡率分别为7.10%、11.87%、25.78%，高于其他纳米粒；HepG2细胞对α-Hed-GC-CD147-NP的细胞摄取率最高，2h和24h分别达（86.73±11.29）%和（94.61±4.42）%；随着时间的延长，纳米粒大部分被摄入到包浆，并能进入细胞核，α-Hed-GC-CD147-NP与HepG2细胞的亲和力更强，具有良好的肝肿瘤细胞靶向性。研究了α-Hed-GC-CD147-NP的急性毒性，对荷HepG2移植瘤裸鼠的抗肿瘤活性及体内靶向性。结果表明，各纳米粒小鼠尾静脉注射LD50均在12mg·kg-1以上，高于原料药；各剂量组对荷HepG2细胞裸鼠肿瘤的抑制率IRw均在70%以上，远高于原料药中剂量组；具有双重复合介导机制的α-Hed-GC-CD147-NP抑瘤率最高，低、中、高3个剂量组的抑瘤率分别为84.96%、88.25%、92.46%，显示了更好的肝肿瘤靶向性。荷瘤裸鼠近红外荧光成像实验结果表明，经受体或抗体介导的纳米粒，肿瘤和肝脏靶向性更强。建立了UPLC-MS法测定体内血浆及组织样品中α-Hed的分析方法，考察α-Hed-GC-CD147-NP在大鼠体内的药物动力学特征，及在荷瘤裸鼠体内组织分布情况。结果表明，药物在大鼠体内呈双室模型，α-Hed-GC-NP、α-Hed-CS-CD147-NP及α-Hed-GC-CD147-NP的t1/2(α)分别为0.12、0.10、0.05h，t1/2(β)分别为0.97、2.30、1.93h，与原料药相比，各纳米粒体内分布、消除减慢。以α-Hed的AUC为参照，上述3种纳米粒的生物利用度显著提高，分别为120%、300%及280%。抗体或受体介导的纳米粒，在肝脏和肿瘤组织内的药物量远远高于其他组织，具有极显著性差异，显示了良好的肝脏和肿瘤靶向性。双重复合机制介导纳米粒α-Hed-GC-CD147-NP在荷瘤裸鼠的肝脏和肿瘤内的分布量最高，优于单一抗体或受体介导纳米粒。
【作者】游本刚；
【导师】张学农；
【作者基本信息】苏州大学，放射医学，2013，博士
【关键词】α-常春藤皂苷；N-乳糖酰壳聚糖；CD147单抗；纳米粒；主动靶向；

【参考文献】
[1]丁冠军,丁明,汤广福,贺之渊.新型多电平VSC子模块电容参数与均压策略[J].中国电机工程学报,2009,30:1-6.
[2]于斌.军转干部自主择业问题研究[D].长春工业大学,社会学,2013,硕士.
[3]冯涛.中国企业跨国并购中的文化整合研究[D].西南大学,政治经济学,2013,硕士.
[4]俞立,陈国定,潘海天.不确定离散时间系统的H_2/H_∞最优保性能控制[J].控制与决策,2001,02:151-154.
[5]何泓.船舶网络通信可靠性研究[D].大连海事大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[6]程静.关于中国高中历史教科书中“冷战起源”问题的研究与反思[D].东北师范大学,世界史,2012,硕士.
[7]师伟.我国网络交易中消费者公平交易权保护的法律对策[D].四川省社会科学院,法律（专业学位）,2014,硕士.
[8]余芬芬.高温共烧陶瓷（HTCC）用丝网印刷浆料的制备工艺与特性研究[D].华中师范大学,化学工程,2014,硕士.
[9]刘德富,陈环宇,程广焕,邓经友,胡宝兰,楼莉萍.堆肥过程中胡敏素的变化及其对五氯苯酚(PCP)吸附能力的影响[J].浙江大学学报(理学版),2014,05:545-552.
[10]陈小林.《DynamicsofFeedbackSystems》简介[J].自动化学报,1985,02:189.
[11]叶丽.3种富EPA海洋微藻的诱变育种[D].宁波大学,渔业（专业学位）,2014,硕士.
[12]柴媛.杨木高强度微波预处理机制与特性研究[D].中南林业科技大学,木材科学与技术,2014,硕士.
[13]徐春华.利用TTI法恢复原始地层厚度实例[J].石油地球物理勘探,1996,01:131-135+166.
[14]常化仿.表面增强拉曼光谱结合胶体金免疫层析技术（SERS-ICA）的研究和应用[D].苏州大学,分析化学,2013,硕士.
[15]孔杰杰.大豆曲茎性状基因定位、表达谱及候选基因功能分析[D].南京农业大学,作物遗传育种,2012,硕士.
[16]张恩阳.表面微凹坑阵列对流体动压润滑性能的影响[D].南京航空航天大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[17]李鸣娜.SiewertⅡ、Ⅲ型食管胃结合部腺癌两种外科手术入路治疗效果的研究[D].河北医科大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[18]张小路,王钟.瞬变电磁测深在海南福山凹陷的试验研究[J].石油地球物理勘探,1997,06:878-883+890.
[19]刘永生.真空蒸发制备CdSe_xTe_(1-x)薄膜及其Sb掺杂的研究[D].内蒙古大学,物理电子学,2014,硕士.
[20]左劼.基因表达式编程核心技术研究[D].四川大学,2004.
[21]赵亮.L型高处作业悬吊平台力学性能分析及结构优化[D].沈阳建筑大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[22]金艺.从感性消费看品牌服装体验店的存在价值[D].武汉纺织大学,设计艺术学,2014,硕士.
[23]杨蓉.论东坡词在宋金元的传播与接受[D].福建师范大学,中国古代文学,2004,硕士.
[24]宋政刚.城市生活垃圾制备RDF富氧燃烧基础研究[D].沈阳航空航天大学,安全技术及工程,2011,硕士.
[25]邵健.甘氨酸盐-TEA脱除燃煤烟气中CO_2的试验研究[D].华东交通大学,市政工程,2013,硕士.
[26]吴鹏伟.医患关系的媒介框架研究[D].安徽大学,新闻与传播学,2013,硕士.
[27]陆康勇.从《高僧传》看魏晋南北朝僧人的社会生活[D].湖北大学,中国古典文献学,2011,硕士.
[28]臧慧娟.山西房地产业发展现状及对国民经济的影响[D].山西财经大学,社会保障,2013,硕士.
[29]张嘉,张婳,孙颖,王兴华,宋大千.金属纳米粒子修饰的氧化石墨烯在SPR传感器中的应用[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第03分会：分析可视化及交叉学科新方法[C].中国化学会:,2014:1.
[30]郭建宇.拉曼光谱研究人血清白蛋白与药物的相互作用[D].华东师范大学,无机化学,2004,硕士.
[31]张晓龙.德国小蠊对氯菊酯击倒抗性与基因频率关系的研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,病原生物学,2004,硕士.
[32]胡丹.基于绩效考核的睿诚管理咨询公司薪酬体系设计[D].吉林大学,工商管理,2013,硕士.
[33]吴欣阳.乐器·乐人·乐意—潮州琵琶演奏行为与特征的考察研究[D].星海音乐学院,音乐学,2014,硕士.
[34]刘安琦.改革开放以来中国共产党收入分配理论的创新性研究[D].郑州大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[35]张俊强.A公司配送中心作业流程优化研究[D].北京交通大学,2012.
[36]饶贞.光固化聚氨酯丙烯酸酯胶黏剂的制备与性能[D].中南民族大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[37]刘毅.弧形排列抗滑桩综合支挡结构研究[D].西南交通大学,岩土工程,2014,硕士.
[38]韩冰.我国工业废水集中处理制度的构建研究[D].苏州大学,环境与资源保护法学,2012,硕士.
[39]赵丽红.北方山地丘陵类型区金属矿土地复垦方案的设计比较研究[D].内蒙古师范大学,土地资源管理（专业学位）,2012,硕士.
[40]丁军.我国人口因素对住宅价格的影响[D].复旦大学,金融工程管理,2012,硕士.
[41]李真.基于事件序列组播源认证方案的研究与实现[D].广西师范大学,计算机软件与理论,2003,硕士.
[42]钟庆昌,谢剑英.基于正向响应增强器的反向响应过程控制[J].控制与决策,2000,05:629-630+636.
[43]陈健.上海金融产业集群发展研究[D].北京大学,区域经济学,2014,硕士.
[44]郝亚姣.高帧频探测器的电路设计[D].中国科学院研究生院（西安光学精密机械研究所）,信号与信息处理,2013,硕士.
[45]樊庆琦.普通玉米4个籽粒性状的遗传分析[D].四川农业大学,2004.
[46]邬琦.中小商业银行对未上市中小企业客户贷款定价研究[D].内蒙古财经大学,统计学,2012,硕士.
[47]林凡敬.变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ccpA突变的检测[D].吉林大学,口腔临床医学,2013,硕士.
[48]葛松胜.新疆敦德铁矿特征和成因[D].中国地质大学（北京）,矿产普查与勘探,2013,硕士.
[49]刘晓平.基于目标场景（GBS）的体验学习环境设计研究[D].扬州大学,教育技术学,2012,硕士.
[50]丁金诺.浅谈地方高校政工队伍现状及对策——以辅导员为例[J].云南社会主义学院学报.